科研抗体使用知多少？

2020年11月23日，由临研所和科研处联合组织的学术讲座“抗体使用中的问题和解决方案”在A栋第三会议室顺利进行。讲座由张伟研究员主讲，临研所医学实验研究平台潘琳老师主持。张伟研究员主要从抗原抗体反应的特点、市售抗体情况及个性化抗体制备三个方面予以讲解，来自临研所及临床多学科的工作人员及研究生参加了讲座。

张伟，研究员，剑桥大学博士。中国医学科学院基础医学研究所免疫室研究员，博士研究生导师，兼任北京爱博生生物技术有限公司总经理。张伟教授长期从事免疫球蛋白及免疫球蛋白受体的基础科研和应用研究，对抗体的使用和制备有着丰富的经验。

抗体是具有Y字型结构的蛋白，两条一样的重链和两条一样的轻链，轻链分两型：l型和k型。重链有五种：a, d, e, g, m链，根据重链将免疫球蛋白分成五类：IgA, IgD, IgE, IgG和IgM。免疫检测中主要使用IgG抗体，少量IgM抗体。抗体可变区的多样性由基因重排、体细胞突变等机制产生，结果生成巨大的抗体库，可以结合种类繁多的各种抗原：细菌、病毒、蛋白质、多糖、核酸、有机小分子等。

抗体与抗原特异性结合，抗原上被抗体识别的部位叫抗原决定簇或者表位，表位分线性表位（连续）和构象表位（不连续）。其中，蛋白不断裂，线性表位就不被破坏；若蛋白变性，构象表位多半被破坏了。例如，Western Blot过程中，蛋白经过高温变性，SDS变性处理，变为线性结构，其构象表位完全破坏，抗体能够结合的抗原位点是蛋白的氨基酸线性表位。

抗体与抗原结合的特点之一是精细识别，抗体用可变区上的CDR（互补决定区）结合抗原表位。有些抗原表位很小，约为5-15个氨基酸、5-7个单糖、 5-7个核苷酸。抗原表位太小带来的问题包括交叉反应，即抗体识别不同抗原上同样或类似的表位，分析结果时应考虑有无交叉反应，设计抗原时不要忽略交叉反应问题。抗体与抗原表位结合的另一个特点是近距离表面结合，抗体结合抗原时，抗原表位必须暴露在表面，因此抗原设计时应该考虑使用时的应用场景。

接下来，张老师与大家分享了科研工作中抗体使用的一些经验，包括购买抗体时，应参考：

1.是否有研究者用该抗体做同样检测，并发表了研究论文；

2.是否有熟悉的研究者用过该抗体做同样的检测；

3.是否为著名品牌抗体；

4.抗体在网站上的介绍和评价，如应用范围和客户打分等。

实验中，二抗可能会因非特异性识别造成本底过高、出结果速度较慢、难以进行多重染色及无法选择特殊交联物等问题；定点直标一抗的优点包括快速出结果、避免二抗引起的本底、可以进行多重染色及可以交联常规市售抗体不交联的物质。

最后，张伟研究员结合工作中的实例，在制备抗体方面与大家进行经验分享，针对制备抗体的一些关键节点及常见问题，例如抗原与免疫动物相应蛋白的同源性问题、抗原与检测系统中其他蛋白的同源性问题等，与听者进行广泛而深入的交流。